Purification and modeling of linear gradient elution chromatography of tagI endonuclease

---

Tezin Türü: Yüksek Lisans

Tezin Yürütüldüğü Kurum: Boğaziçi Üniversitesi, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, Türkiye

Tezin Onay Tarihi: 1999

Tezin Dili: İngilizce

Öğrenci: MEHMET GÜRCAN DÜZENLİ

Danışman: ŞEFİKA KUTLU ÜLGEN

Özet:

ÖZET Biyokimya alanında yapılan çalışmaların büyük bir bölümü protein ve enzimlerin saflaştırılması ve analizi üzerinedir. Değerli proteinlerin kromatografik yöntemlerle saflaştmlmasının önemi son yıllarda daha da anlaşılmıştır. Bu çalışmada ilk olarak, Tagî endonükleazmın saflaştırılması işlemi HPLC yöntemiyle, iyon deştirici kolonlar kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla katyon değiştirici kolonda hareketli faz olarak sodyum asetat (pH: 5.0) ve fosfat (pH:7.0), anyon değiştirici kolonlarda ise L-Histidine (pH:6.0) ve Tris (pH:8.0) kullanılmıştır. Deneysel sonuçlar, anyon değiştirici kullanılarak elde edilen enzim miktarının katyon değiştirici kullanılarak elde edilenin üç katı olduğunu göstermiştir. Kolona enjekt edilen miktarın optimum değeri 3 mi olarak bulunmuştur; zira daha az miktarda enjeksiyon, seyrelmeden kaynaklanan aktivite kaybına sebep olmuş, daha fazla miktardaki enjeksiyonun ise kolonun aşın yüklenmesine sebep olduğu bildirilmiştir. İkinci aşamada ise, birinci bölümde elde edilen deneysel profiller, baza modellerin sayısal olarak çözülmesiyle elde edilmiştir. Bu modellerden Denge teorisi en iyi yaklaşımı verirken; Hız ve Raf teorileri, Tagl endonükleazı hakkındaki fiziksel/kimyasal özelliklerin yeterince bilinmemesinden dolayı genellikle başarısız olmuştur. Ayrıca bazı deneysel ve matematiksel parametrelerin hesaplanan profiller üzerindeki etkisi incelenmiştir.