Investigating the role of g protein coupled receptor (gpcr) activation in ochratoxin A (OTA)-induced toxicity
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Boğaziçi Üniversitesi, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, GENEL BİYOLOJİ ANABİLİM DALI, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2018
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: BEREN AYLAN
Danışman: İBRAHİM YAMAN
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Okratoksin A çok güçlü bir nefrotoksin olarak kabul edilmiştir. Böbreklerdeki proksimal tübül hücrelerinde birikerek DNA hasarına, mitokondrisel bozukluklara ve bununlarla beraber hücresel yıkıma sebep olmaktadır. OTA etkisini hem hücresel hayatta kalmada hem de hücresel ölümde göstermektedir. Bunu da mitojenle etkinleşen protein kinaz (MAPK) ve fosfotidilinositid 3-kinaz/Akt (PI3K/Akt) yolaklarını deregüle ederek başarmaktadır. Bundan önceki araştırmalar HK-2 hücrelerinde PI3K/Akt yolağı nın aktivasyonunun OTA'nın cMET reseptör tirozin kinazini aktive etmesiyle olduğunu göstermiştir. PI3K/Akt yolağının aktivasyon kaynağı bilinmesine rağmen MAPK/ERK 1/2 yolağı hakkında çok fazla bilgiye sahip olunmamaktadır. MAPK'lar birçok reseptör tarafından regüle edilmekle beraber önceki bilgilerimiz bu yönlendiricinin G proteine bağlı reseptörler olabileceğini göstermektedir. Bu çalışmada OTA tarafından başarılan GPCR aktivasyonunu gösterilmiş ve bunu yapmak için cAMP, beta-arrestin ve ERK1/2'den yardım alınmıştır. EPAC biyosensörü ve FRET teknolojisini kullanılarak kısa süre OTA'ya maruz bırakılmaktan dolayı oluşan cAMP artışı gösterilmiştir. Daha sonraki zaman aralıklarındaki Galfai aktivasyonu ile oluşan cAMP düşüş eğilimi çeşitli kipleyicilerle gösterilmiştir. Bunlara ek olarak OTA ile oluşan reseptör desensitizasyonu ve yıkımı Rab9, Rab11 içeren endozomlarda β-arrestin bulunmasıyla gösterilmiştir. β-arrestin 1'in hücrelerde fazla üretilmesinin ERK1/2 fosforlanmasına engel oluşu ve β-arrestin 2'nin hücrelerde fazla üretilmesinin ERK1/2 fosforlanmasına yardımcı oluşu da bu bulguları desteklemiştir. Bu sonuçlar ışığında OTA aracılığıyla ortaya çıkan ilk GPCR sinyalizasyonunu cAMP, G protein, β-arrestin ve ERK1/2 regülasyonu yardımları ile gösterilmiştir.