Translational regulation of kidney injury molecule-1 mRNA: presence of an internal ribosomal entry site
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Boğaziçi Üniversitesi, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2014
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: NEHİR BANAZ
Danışman: İBRAHİM YAMAN
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Böbrek Hasarı Molekülü-1 (KIM-1) toksik veya iskemik hasar sonrası dediferan- siye olmuş böbrek proksimal tübül epitel hücrrelerinde büyük ölçüde ifade edilen birinci tip transmembran bir glikoproteindir. KIM-1,Amerikan Gıda ve İlaç Örgütü (FDA) ile Avrupa İlaç Örgütü tarafından kabul edilmiş bir nefrotoksisite belirtecidir, dolayısıyla bu genin kemotoksik stres altında transkripsiyonel ve translasyonel düzenlenmesini anlamak oldukça ̈onem arz etmektedir. Kemotoksisite ajanları olarak böbrek hücrelerinde stres yarattığı bilinen Okratoksin A, Sisplatin ve Gentamisin kullanılmıştır. Bu kimyasalların zaman ve doza bağımlı olarak insan böbrek hücre dizini HK-2 hücrelerindeki sito- toksik, nekrotik, apoptotik ve proliferatif etkileri saptanmıştır. cDNA Uçlarının Seri Amplifikasyonu (RACE) protokolüyle Kim-1 geninin transkripsiyon başlangıç bölgesi belirlenmiştir. Ayrıca, kemotoksik ajanlar etkisinde KIM-1 mRNA ve protein ifadelerindeki değişimler kantitatif gerçek ̧zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu ve western blotlama teknikleri ile ölçülmüştür. Kimyasalla muamele sonrasında hücrelerdeki toplam protein sentezindeki azalmaya rağmen, KIM-1 geninin protein ifadesinin arttığı gözlemlenmiştir. Bunun yanı sıra, KIM-1 mRNA düzeyinde kaydadeğer bir değişim görülememiştir. Bu sebepten ötürü Kim1- mRNA'sının translasyonunun dahili ribozom giriş bölgesi (IRES) mekanizmasıyla post-transkripsiyonel olarak düzenlendiğine dair bir hipotez geliştirilmiştir. Bu hipotez in vitro ortamda iki raportör protein ve KIM-1 geninin 5'UTR bölgesini içeren pRF vektör sistemi kullanılarak sınanmıştır. Elde ettiğimiz sonuçlar olası bir IRES bölgesinin KIM-1 mRNA'sının translasyonel ba ̧slangıç kodonunun 300 baz yukarısında olduğunu destekler niteliktedir.