Recovery of antithrombin III from milk by expanded bed chromatography
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Boğaziçi Üniversitesi, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2001
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: AYŞE SİNEM ÖZYURT
Danışman: ŞEFİKA KUTLU ÜLGEN
Özet:ÖZET GENİŞLETİLMİŞ YATAK KROMATOGRAFİSİ KULLANILARAK ATIIFÜN SÜTTEN SAFLAŞTIRILMASI İÇİN YENİ BİR YÖNTEM GELİŞTİRİLMESİ Tedavi amaçlı proteinlerin üretimi için yüksek verim ve düşük maliyetli yeni ekipman ve maddelerin geliştirilmesi çok önemlidir. Antithrombin kanın pıhtılaşma sürecinin ana düzenleyicisi ve insanlarda klinik deneylere başlanan transgenik metodlarla üretilmiş ilk proteindir. Bu çalışmada, antithrombinin saflaştırılması için genişletilmiş yatak teknolojisi kullanılarak yeni bir yöntem geliştirilmiştir. Sütün yağı santrifüj yapılarak giderilmiş ve kasemleri ise çinko klorür ile çöktürülmüştür. Sonra, yağı alınmış ham süt iyon değiştirici dolgu maddesi içeren genişletilmiş bir yatağa direk olarak beslenmiştir. Katyon değiştiricisi (Pil) yüzde 100 adsorpsiyon ve yüzde 13 geri kazanma verimi verirken, anyon değiştiricisi (DE 52) ise yüzde 100 adsorpsiyon ve yüzde 84 geri kazanma verimi göstermiştir. 25 mM Tris-HCl (pH 8.0) ve 20 mM L-Histidine (pH 6.0) tampon çözeltileri kullanımı ile yüzde 84 geri kazanma verimi elde edilerek antithrombinin 5 katma kadar saflaştırılması gerçekleştirilmiştir. 2 M (NH^SCVün desorpsiyon ajanı olarak kullanımı iyon değiştirici genişletilmiş yatakta antithrombinin saflaştırılması için en uygun durum olarak belirlenmiştir. Genişletilmiş yatak boyunun, sabit yatak dolgu maddesinin 2 ila 3 katı olduğu durumlarda etkili bir genişletilmiş yatak adsorpsiyonu elde edilmiştir. Kromatografik kolon çaplan karşılaştırıldığında, kolon çapı 1 cm' den 2 cm' e çıktığı zaman adsorpsiyon veriminin de 2 katma çıktığı gözlenmiştir. Bununla beraber, ATIII en küçük çaplı kolonda, yani 1 cmlik kolonda, en fazla konsantre edilebilmiştir.