Development of a drosophila CMT model via overexpression and knocking-in of GDAP1 gene
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: Boğaziçi Üniversitesi, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, FEN BİLİMLERİ ENSTİTÜSÜ, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2013
Tezin Dili: İngilizce
Öğrenci: HÜSEYİN KAYA AKYÜZ
Danışman: ARZU ÇELİK FUSS
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Charcot-Marie-Tooth (CMT) en sık görülen kalıtsal sinir sistemi hastalıklarından biridir. Kalıtsal motor ve duysal nöropati olarak da bilinen bu hastalık distal duysal kayıp, kas güçlüğü ve atrofi, derin tendon reflekslerinin kaybı ve özellikle alt ekstremitelerde iskelet bozukluklarıyla ayırt edilmektedir. Ancak genetik açıdan çok heterojen bir hastalıktır ve yaklaşık 40 gen bu hastalıkla ilişkilendirilmiştir. Baskın kalıtım da göstermesinin yanında, çekinik kalıtılan CMT içerisinde en sık mutasyon görülen genlerden biri GDAP1?dir. Mutasyonlarının, hastalığın demiyelizan, aksonal ve ara tiplerine ve çoğunlukla şiddetli ve erken başlangıçlı nöropatiye sebep olması, bu geni moleküler çalışmalar için önemli bir aday yapmaktadır. Bu araştırma çerçevesinde, GDAP1'in sinekteki homoloğu CG4623'ün yüksek anlatımı ve CG4623 yerine yerleştirilebilecek yapıların oluşturulması ile Drosophila CMT modeli geliştirmeyi amaçladık. Araştırmanın ikinci amacı glutatyon S-transferaz aktivitesine sahip mitokondriyal fizyon faktörü olan GDAP1 ve karakterize edilmemiş CG4623 proteinlerinin işlevlerini anlamaktır. Araştırmanın ilk kısmında integraz aracılığıyla gen silme yöntemi için araçlar geliştirilmiştir. Oluşturulan araçlar arasında Drosophila homoloğunun (CG4623) yerine yerleştirmek üzere GDAP1 ve GDAP1?in CMT?ye sebep olan dokuz mutant formu için yapılar, bir GAL4 yükselticisi ve CG4623 için mCherry raportörü bulunmaktadır. Bunların yanında, anti-CG4623 antikorunu üretmek için gerekli moleküler yapılar da oluşturulmuştur. Çalışmanın ikinci kısmında, CG4623 geninin işlevini anlamak ve insandaki ortoloğuyla karşılaştırmak üzere UAS kontrolü altında bu geni yüksek anlatan bir sinek hattı geliştirilmiştir. Son olarak, mitokondriyal dinamikler ile ilgili genlerin mevcut mutant hatları kullanılarak yaşam süresi ve mitokondriyal dinamiklerin analizleri gerçekleştirilmiştir. Bu analizlerin ileride knock-in ve yüksek anlatım hatlarında uygulanabilir olması için ortam hazırlanmıştır. Bu araştırmayla, nihai amacımız, CMT hastalığının sinek modelinin oluşturulması çalışmalarını laboratuvarımızda başlatarak GDAP1?in işlevi ve nöropatideki rolünü incelemek ve böylece hastalığın oluşumu ve gelişimine ışık tutmaktır.